WWW.LIBRUS.DOBROTA.BIZ
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - собрание публикаций
 

«СОКИ ФРУКТОВЫ Е И О ВО Щ Н Ы Е Метод определения D -яблочной кислоты Издание официальное ГОССТАНДАРТ РОССИИ Москва долевое строительство ГОСТ Р 51940-2002 Предисловие 1 РАЗРАБОТАН ...»

ГОСТ Р 5 1 9 4 0 -2 0 0 2

ГО СУДА РСТВЕН Н Ы Й СТАНДАРТ РО С С И Й С К О Й Ф ЕДЕРА Ц И И

СОКИ ФРУКТОВЫ Е И О ВО Щ Н Ы Е

Метод определения D -яблочной кислоты

Издание официальное

ГОССТАНДАРТ РОССИИ

Москва

долевое строительство

ГОСТ Р 51940-2002

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Московским государственным университетом пищевых производств ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропро­ мышленной продукции на безопасность»

2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 25 сентября 2002 г. № 348-ст 3 Настоящий стандарт за исключением раздела 2 и пунктов 3.2, 5.3—5.5, 6.1, 6.5 и 6.6 пред­ ставляют собой аутентичный текст национального стандарта ФРГ ДИН ЕН 12138—97 «Фруктовые и овощные соки. Ферментативное определение D-яблочной кислоты. Спектрофотометрическое определение НАД»

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Госстандарта России © ИПК Издательство стандартов, 2002 © СТАНДАРТИНФОРМ, 2008 Переиздание (по состоянию на июль 2008 г.) II ГОСТ Р 51940-2002 Содержание 1 Область применения

2 Нормативные ссы лки

3 Определение, обозначения и сокращения

4 Сущность метода

5 Реактивы

6 Аппаратура

7 Проведение испытания

8 Выражение результатов

9 Точность определения

10 Отчет об испытании

Приложение А Медленнотекущие реакции

Приложение Б Статистические результаты кругового испытания

Приложение В Библиография

–  –  –

1 Область применения Настоящий стандарт распространяется на фруктовые и овощные соки, нектары и сокосодер­ жащие напитки и устанавливает метод определения массовой концентрации D-яблочной кислоты .

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 1770—74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, про­ бирки. Общие технические условия ГОСТ 3769—78 Аммоний сернокислый. Технические условия ГОСТ 4328—77 Натрия гидроокись. Технические условия ГОСТ 6709—72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 9262—77 Кальция гидроокись. Технические условия ГОСТ 24104—88* Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия ГОСТ 24363—80 Калия гидроокись. Технические условия ГОСТ 29227—91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные .

Часть 1. Общие требования ГОСТ Р ИСО 5725-2—2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений .

Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений ГОСТ Р 51652—2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия

3 Определение, обозначения и сокращения

3.1 В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующим определением:

массовая концентрация D-яблочной кислоты во фруктовых и овощных соках, нектарах и соко­ содержащих напитках: Массовая концентрация D -яблочной кислоты, определенная в соответствии с настоящим стандартом и выраженная в граммах на кубический дециметр .

3.2 В настоящем стандарте применяют следующие обозначения и сокращения:





НАД — |3-никотинамидадениндинуклеотид;

НАДН — р-никотинамидадениндинуклеотид, восстановленная форма;

* С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104—2001 .

Издание официальное ГОСТ Р 51940-2002 D-МДГ — D-малатдегидрогеназа;

Е — международная единица, определяющая количество (активность) фермента, кото­ рый служит катализатором для превращения 1 мкмоля вещества в минуту при 25 °С .

–  –  –

Метод основан на ферментативном преобразовании [1,2] D-яблочной кислоты в оксалоацетат под действием НАД в присутствии D-МДГ и спектрофотометрическом измерении массовой кон­ центрации образовавшегося НАДН, эквивалентного массовой концентрации D-яблочной кислоты в пробе. Оксалоацетат в конце реакции распадается на пируват и углекислый газ .

В ходе анализа протекает следующая ферментативная реакция:

–  –  –

В связи с тем, что фермент D-МДГ не обладает абсолютной специфичностью, при испытаниях проб, содержащих наряду с D-яблочной L-винную кислоту, для связывания последней воздействуют гидроокисью кальция и этиловым спиртом .

–  –  –

5.1 Общие требования При проведении анализа используют реактивы х.ч., ч.д.а. и дистиллированную воду по ГОСТ 6709 .

Препараты НАД должны содержать не менее 90 % основного вещества .

Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов для определения D-яблочной кислоты и отдельные реактивы при условии, что качество реактивов не ниже указанного в настоящем стандарте .

5.2 Стандартный набор состоит из трех реактивов .

5.2.1 Реактив 1 — HEPES-буфер (4- (2-гидроксиэтил)-1-пиперазин-этансульфоновая кислота) объемом 30 см3 и активной кислотностью 9,0 pH, содержащий стабилизаторы [3] .

5.2.2 Раствор реактива 2 — НАД Флакон, содержащий 0,21 г лиофильно высушенного НАД [3], растворяют в 4 см3 дистилли­ рованной воды .

5.2.3 Раствор реактива 3 — D-МДГ удельной активностью около 13 Е/см3 Одну из трех содержащихся в наборе порций лиофильно высушенной D-МДГ [3] растворяют в 0,6 см3 дистиллированной воды .

5.3 Кальция гидроокись по ГОСТ 9262 .

5.4 Спирт этиловый по ГОСТ Р 51652 массовой долей основного вещества 96 % .

5.5 Калия гидроокись по ГОСТ 24363 .

6 Аппаратура

Обычная лабораторная аппаратура, а также:

6.1 Дозаторы пипеточные объемами доз 0,02; 0,05; 0,10; 0,50; 1,0; 2,0; 5,0 и 10 см3 и относи­ тельной погрешностью дозирования +1 % [4] или пипетки градуированные по ГОСТ 29227, номи­ нальной вместимостью 0,02; 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 и 2,0 см3, 2-го класса точности .

6.2 Кюветы фотометрические из оптического стекла или пластмассы толщиной поглощающего слоя 1 см для измерений при длинах волн 334, 340 или 365 нм .

6.3 Шпатели пластиковые или палочки стеклянные оплавленные длиной от 10 до 15 см для перемешивания содержимого кюветы при проведении фотометрических измерений .

6.4 Спектрофотометр или фотометр фотоэлектрический для измерений при длинах волн 334, 340 или 365 нм, допускаемой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропус­ кания ±1 % .

6.5 Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104, наибольшим пределом взвешива­ ния 20 г, 2-го класса точности .

ГОСТ Р 51940-2002

6.6 Колбы мерные по ГОСТ 1770 номинальной вместимостью 50 см3 .

6.7 Фильтры мембранные диаметром пор 0,2 мкм .

–  –  –

7.1 Подготовка пробы к испытанию 7.1.1 Стандартная методика Как правило, пробы не нуждаются в особых методиках подготовки к испытаниям. Результаты испытаний, выполненных в соответствии с настоящей методикой, выражают в миллиграммах на кубический дециметр .

Испытания концентрированных продуктов проводят после их разбавления дистиллированной водой до получения значения относительной плотности разбавленного продукта согласно рецептуре натурального сока, нектара или сокосодержащего напитка. При этом относительную плотность разбавленной пробы выражают в граммах на кубический дециметр .

Результаты испытаний концентрированного продукта могут быть также выражены в милли­ граммах на килограмм. При расчете результата испытаний учитывают массу пробы концентриро­ ванного продукта и фактор разбавления .

При испытании продуктов высокой вязкости и/или с очень большим содержанием мякоти результаты выражают в миллиграммах на килограмм продукта .

Продукты с мутной взвесью перед испытанием хорошо перемешивают и осветляют путем центрифугирования .

Сильно окрашенные продукты разбавляют дистиллированной водой .

7.1.2 Модицированная методика (для проб с высокой концентрацией винной кислоты) К 25 см3 сока, нектара или сокосодержащего напитка добавляют 0,125 г сухой гидроокиси кальция и 5 см3 этилового спирта. Пробу перемешивают 2 мин. Активную кислотность раствора устанавливают равной 7—8 pH, добавляя сухую гидроокись калия. Раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3. Объем раствора доводят до метки дистиллированной водой .

При проведении ферментативного определения используют прозрачную осветленную пробу. При необходимости раствор осветляют по 7.1.1 .

7.2 Испытание 7.2.1 Общие требования Испытание проводят при постоянной температуре от 20 до 25 °С. Допускается проводить испы­ тание при постоянной температуре от 25 до 37 °С при условии получения равноценных результатов .

При использовании спектрофотометра с переменной длиной волны измерения проводят при длине волны 340 нм, при использовании спектрофотометра на ртутной лампе — при длине волны 334 или 365 нм .

Буферные растворы, растворы проб, ферментов и коферментов дозируют градуированными пипетками или автоматическими дозаторами .

Для контроля точности результатов определения используют стандартный раствор D -яблочной кислоты .

7.2.2 Контрольный раствор В кювету спектрофотометра (фотометра) вносят 1,00 см3 HEPES-буфера по 5.2.1; 0,10 см3 раствора НАД по 5.2.2 и 1,80 см3 дистиллированной воды, перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой. Раствор выдерживают 6 мин и измеряют оптическую плотность относи­ тельно оптической плотности воздуха — AiK .

7.2.3 Раствор пробы В кювету спектрофотометра (фотометра) вносят 1,00 см3 HEPES-буфера по 5.2.1; 0,10 см3 раствора НАД по 5.2.2; 1,70 см3 дистиллированной воды и 0,10 см3 подготовленной пробы, переме­ шивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой. Раствор выдерживают 6 мин и измеряют оптическую плотность относительно оптической плотности воздуха — ^41прФерментативная реакция и количественное определение В кюветы с контрольным раствором по 7.2.2 и раствором пробы по 7.2.3 вносят по 0,05 см3 раствора D-МДГ по 5.2.3 и перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой. Через 20 мин измеряют оптические плотности растворов относительно оптической плотности воздуха — А2пр и А2к .

Показания прибора проверяют повторным считыванием оптических плотностей через 5 мин. Если опти­ ческие плотности растворов увеличиваются с течением времени, то окончательные значения оптических плотностей определяют методом экстраполяции на момент внесения раствора D -МДГ по 5.2.3 .

ГОСТ Р 51940-2002 П р и м е ч а н и е —При появлении побочных, так называемых «медленнотекущих», реакций расчет окон­ чательных значений оптической плотности проводят по методике, приведенной в приложении А .

8 Выражение результатов Разность измеренных величин оптических плотностей АА вычисляют по формуле

–  –  –

где М — молярная масса D -яблочной кислоты, г/моль (М = 134,09 г/моль);

Vx — общий объем раствора в кювете, см3;

F — фактор разбавления по 7.1.1 или 7.1.2;

е — молярный коэффициент поглощения НАДН, дм3 ммоль- 1 см-1 :

- при 340 нм — 6,3;

- при 365 нм — 3,4 (ртутная лампа);

- при 334 нм — 6,18 (ртутная лампа);

5 — толщина поглощающего слоя в кювете, см;

V2 — объем пробы, см3 .

При отсутствии отклонений от объемов, указанных в 7.2, формула принимает вид FAA (4) р = 3,956 г При использовании имеющихся в продаже отдельных реактивов численный коэффициент (3,956) в формуле (4) может быть иным из-за изменения общего объема раствора в кювете (1/) .

За результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов двух парал­ лельных определений, округленное до 0,1 мг/дм3 .

9 Точность определения

Характеристики точности метода вычислены по статистическим результатам кругового испы­ тания (приложение Б) .

9.1 Сходимость Абсолютное расхождение между результатами двух параллельных определений, выполненных в одной лаборатории, не должно превышать более чем в 5 % случаев значения показателя сходимости г, мг/дм3, вычисляемого по формуле

–  –  –

В отчете об испы тании долж ны быть указаны:

- инф орм ация, которая необходима для идентиф икации пробы (вид пробы, данны е изготови­ теля, описание пробы);

- обозначение настоящ его стандарта;

- дата и способ отбора пробы (если возмож но);

- дата доставки пробы;

- результаты испы тания и наим енования единиц изм ерений, в которы х они приводятся;

- дата испы тания;

- инф орм ация о вы полнении условий сходимости метода;

- зам ечания об особенностях проведения испы тания;

- особые условия проведения испы тания, которы е не учтены настоящ им стандартом, но могли бы оказать влияние на результаты испы тания .

ГОСТ Р 5 1 9 4 0 -2 0 0 2

–  –  –

Медленнотекущие реакции возникают вследствие присутствия в матрице пробы ферментов, не указанных в стандарте, а также вследствие взаимодействия побочных компонентов матрицы с реактивами, участвующими в ферментативной реакции .

При проведении запланированной ферментативной реакции оптическая плотность через 10—20 мин принимает постоянное значение, которое зависит от скорости специфичной ферментативной реакции. При появлении медленнотекущей реакции оптическая плотность раствора пробы в кювете меняется с течением времени .

В случае возникновения медленнотекущей реакции проводят повторные определения оптической плот­ ности раствора пробы в кювете через каждые 2—5 мин. После выполнения 5—6 повторных определений и при условии достижения постоянного изменения оптической плотности за единицу времени (АЛ/At = const) фотометрические измерения прекращают .

По полученным данным строят график зависимости оптической плотности А от времени L Для определения окончательного значения оптической плотности, используемого при расчете массовой концентрации испытуемого вещества, экстраполируют кривую на момент внесения фермента в реакционную систему (t0, рисунок А.1). Для получения достоверных результатов испытания пробы разность конечного (AJ) и начального (А/) значений оптических плотностей должна быть не менее 0,040 .

–  –  –

При проведении в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-2 круговых испытаний получены следующие характеристики точности метода, приведенные в таблице БЛ, и установлена линейная зависимость сходимости и воспроизводимости от среднеарифметического массовой концентрации D-яблочной кислоты .

Испытание проведено под руководством Международной федерации производителей фруктовых соков (г. Париж, Франция) .

Год проведения кругового испытания — 1991 .

Число участвовавших лабораторий — 24/18 .

Количество проб — 3 (с добавкой D-яблочной кислоты) .

–  –  –

[1] Enzymatische Bestimmung der D-Apfelsaeure (D-Malic acid enzymatic method): Official Journal of the European Communities, L272, Volume 33, pages 106—108, published 3.10.1990 [2] Bestimmung der D-Apfelsaeure; Enzymatisch: Nr. 64, 1994. — In: Analysen/[Sammlung] Internationale Fruchtsaft — Union. — Loseblattausgabe, Stand 1996. Zug: Schweizerischer Obstverband [3] Boehringer Mannheim. Methoden der enzymatischen BioAnalytik und Lebensmittelanalytik mit Test-Combinationen, 1995 [4] ТУ 64-13329—81 Дозаторы пипеточные ГОСТ Р 51940-2002 УДК 664.863.001.4:006.354 ОКС 67.160.20 Н59 ОКСТУ9Ю9

–  –  –





Похожие работы:

«Голубцов Павел Евгеньевич ПОЛИМОРФИЗМЫ И ЗАДАЧА О РАЗРУШЕНИИ АДИАБАТИЧЕСКОГО ИНВАРИАНТА 01.02.01 – теоретическая механика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Москва – 2012 Работа выполне...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования кСанкт-Петербургский государственный университет аэрокосмического приборостроения" (ГУАП) ПРИКАЗ •fC: № 05' / УГ //У Санкт-Петербург ГУАП № 0570/17 ^ 5.20 7 Об официальном сайте...»

«GroupWise 18 Часто задаваемые вопросы пользователей GroupWise (FAQ) Октябрь 2018 г. Юридическая информация © Micro Focus или одна из аффилированных с ней компаний, 1993–2018. Micro Focus, а также аффилированные с ней компании и лицензиары (дал...»

«НАВИГАЦИОННЫЙ КОНТРОЛЛЕР ARNAVI 5 РУКОВОДСТВО ПОЛЬЗОВАТЕЛЯ ООО "АРУСНАВИ ЭЛЕКТРОНИКС" Оглавление ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ 1. Технические характеристики 2 . Внешний вид устройства и распиновка основного разъёма НАСТРОЙКА ТРЕКЕРА 1. WEB конфигурат...»

«ОТКРЫТОЕ АКЦИОНЕРНОЕ ОБЩЕСТВО "ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЕТЕВАЯ КОМПАНИЯ ЕДИНОЙ ЭНЕРГЕТИЧЕСКОЙ СИСТЕМЫ" СТО 56947007СТАНДАРТ ОРГАНИЗАЦИИ ОАО "ФСК ЕЭС" 29.120.20.066-2010 Защитная арматура для ВЛ. Технические требования Стандарт организации Дата введения 13.10.2010 ОАО "ФСК ЕЭС" Пре...»

«UNITRONICS – ТОЧКА ВХОДА В "ИНТЕРНЕТ ВЕЩЕЙ" INDUSTRY 4.0 Обзор и позиционирование Klinkmann – европейское предприятие с 90-летней историей, которое специализируется на поставках решений для промышленной автоматизации и электротехнических компонентов.Klinkmann — это: официальный авторизованный дистрибьютор Wonderware (с 2003...»

«Соглашение о взаимодействии F. Липецк " / с о Я ^ / J ^ 2 0 1 8 г. Управление образования и науки Липецкой области в лице начальника Смольянинова Александра Владимировича, действующего на основании Положения; АО "Газпром газораспределение Липецк" в лице...»







 
2019 www.librus.dobrota.biz - «Бесплатная электронная библиотека - собрание публикаций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.